> Electrophorèse : fiche technique
 
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L'électrophorèse est une technique permettant la séparation de molécules porteuses de charges électriques comme les acides aminés, les protéines, les acides nucléiques dont l'ADN...

Principe de cette technique : les molécules à séparer sont placées dans un champ électrique créé par une tension continue. Les molécules chargées négativement se déplacent vers le pôle positif (= l'anode) et celles qui sont chargées positivement se déplacent vers le pôle négatif (= la cathode). La vitesse de migration des constituants chimiques dépend de leur charge électrique totale et de leur masse moléculaire.

Première étape : préparation de la cuve
  La solution tampon est placée dans chaque compartiment en les remplissant au 3/4.
 

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Deuxième étape : placement des bandes
  Les bandes hydratées dans la solution tampon, doivent être tendues au niveau des supports, et plonger dans la solution tampon de chaque compartiment.
 

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Troisième étape : Dépôt des échantillons protéiques à tester en justifiant le choix de la zone de dépôt en fonction des propriétés des protéines (données biochimiques des protéines) ; fermeture de la cuve, mise sous tension du dispositif .
  Les dépôts sont effectuer avec un applicateur à 1 cm du rebord ; la migration s'effectue pendant un temps donné à 160 volts ; mettre sous tension en respectant les consignes de sécurité données par le professeur.
 

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Quatrième étape : révélation ( utilisation d'un colorant spécifique des protéines : le rouge ponceau, puis de bains d'acide acétique permettant le lavage et la fixation )
  Les bandes doivent être placées face vers le colorant ( pendant 5 minutes) pour colorer les empreintes protéiques, puis les bandes sont transférées quelques minutes dans différents bains d'acide acétique pour fixer le colorant sur l'empreinte protéique.
 

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Résultat : on observe les tâches de migration pour chaque type d'échantillon.
 

Résultat d'une électrophorèse d'hémoglobines HbA et HbS.

détail d'un résultat obtenu en classe

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